محیط کشت محیط پایه GC

محیط پایه GC

شکلات آگار اساساً همان آگار خون است با این تفاوت که در حین آماده سازی گلبول های قرمز وقتی به پایه آگار مذاب اضافه می شوند لیز می شوند. در نتیجه، لیز سلولی مواد مغذی داخل سلولی مانند هموگلوبین، هیمین (فاکتور X) و کوآنزیم نیکوتین آمید آدنین دی نوکلئوتید (NAD یا فاکتور V) را در آگار آزاد می کند که توسط باکتری های سختگیر استفاده می شود لیز گلبول قرمز زمانی که آماده می شود رنگ قهوه ای شکلاتی به محیط می دهد که نام آگار از آن گرفته شده است. شایع ترین پاتوژن های باکتریایی که برای رشد به این محیط غنی شده نیاز دارند عبارتند از نایسریا گونوره و گونه های هموفیلوس.

پایه آگار شکلاتی، با افزودن مکمل ها، رشد عالی ارگانیسم های سریع را بدون رشد بیش از حد متوسط موجودات آلوده کننده می دهد. هضم کازئین و بافت حیوانی ارگانیسم را با مواد مغذی نیتروژن دار، اسیدهای آمینه و سایر عناصر ضروری برای رشد ارگانیسم ها تامین می کند. از آنجایی که گونه های نایسریا به مواد سمی مانند اسیدهای چرب بسیار حساس هستند، از این رو افزودن نشاسته ذرت به خنثی کردن متابولیت های سمی احتمالی کمک می کند، در حالی که فسفات پتاسیم به حفظ pH یکنواخت در طول رشد کمک می کند. کلرید سدیم تعادل اسمزی را حفظ می کند و در نتیجه یکپارچگی سلول ها را حفظ می نماید. شکلات آگار نیز به عنوان یکی از انواع پلیت آگار خونداردر نظر گرفته می شود که حاوی گلبول های قرمز خون است که با حرارت آهسته تا 80 درجه سانتی گراد لیز شده اند. گرما آنزیم هایی را غیرفعال می کند که در غیر این صورت می توانند NAD را تجزیه کنند. مکمل های اضافه شده فاکتور X (از هموگلوبین) و فاکتور V (از مکمل رشد) مورد نیاز ارگانیسم های سخت گیر را فراهم می کنند.

همچنین می توان برخی تغییرات را برای رشد ارگانیسم خاص انجام داد. Thayer-Martin Media یک آگار شکلاتی است که با ونکومایسین، نیستاتین و کولیستین برای مهار فلور طبیعی، از جمله نایسریا غیر بیماریزا برای جداسازی انتخابی N. gonorrhoeae و N. meningitidis، تکمیل شده است. آگار شکلات مکمل باسیتراسین یک محیط انتخابی است که برای بهبود جداسازی اولیه H. influenzae از نمونه‌های حاوی فلور مخلوط باکتری و/یا قارچ استفاده می‌شود. آگار شکلات مکمل با پایه GC و مکمل رشد اصلاح دیگری است که نیازهای رشد ویژه (همین و NAD) مورد نیاز برای جداسازی ارگانیسم‌های سخت‌گیر مانند H. influenzae را هنگام انکوبه شدن در دمای 35-37 درجه سانتی‌گراد در اتمسفر CO2 5٪ پشتیبانی می‌کند. .